细胞侵袭

应用简介

肿瘤细胞通过膜表面特定受体与基质或基底膜的层粘连蛋白、纤维连接蛋白和IV型胶原等相粘连，然后肿瘤细胞可释放蛋白水解酶或激活基质中已存在的酶原，使基质成分降解，最后肿瘤细胞运动而充填到被水解了的基质的空隙处，如此三个过程不断重复肿瘤细胞不断向深层侵袭。

技术原理

本实验采用的Matrigel是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原等。将Matrigel铺在Transwell侵袭小室的多孔滤膜上，能形成与天然基底膜极为相似的基底膜结构。具有侵袭能力的细胞在趋化剂诱导下可穿过多孔滤膜，侵袭细胞经染色后，在显微镜下观察和计数。

实验方法

注意事项

1、照相前一定要晾干，照相时将小室正置于载玻片上，在倒置显微镜下观察、照相。

2、使用Matrivgel前应从-20℃转移至4℃待其自然溶化（如过夜放置），避免反复冻融。

3、使用时需接触Matrivgel的试管、移液吸头等均应预冷于4℃。

4、使用Matrivgel时注意无菌操作。

细胞侵袭实验关键在于模拟体内微环境并保证数据准确。铺胶时，Matrigel 基质胶需提前预冷并置于冰上操作，按比例稀释后均匀铺于 Transwell 小室，避免气泡产生，37℃孵育待胶凝固，形成致密的细胞外基质模拟屏障。

接种细胞时，调整细胞密度至关重要，过高易因营养竞争干扰侵袭，过低则导致数据误差，建议每小室接种 1-5×10?个细胞；同时需注意控制小室上、下腔培养液的成分差异，下腔添加含血清或趋化因子的培养基，以形成有效的趋化梯度，吸引细胞定向迁移。

实验结束后，固定、染色过程需轻柔操作，防止小室膜上细胞脱落，选用棉签小心擦除未侵袭细胞，确保染色仅呈现穿过膜的细胞；显微镜观察时，需在多个视野下计数并取平均值，避免主观误差。此外，设置阳性和阴性对照，如使用已知侵袭能力强的细胞系作阳性对照，验证实验体系有效性。