细胞增殖

应用简介

细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老或死亡的细胞。

检测方法

MTT，CCK-8，BrdU，EdU等方法是常见的细胞增殖检测技术，分别从代谢活性和DNA合成的角度来反应细胞的增殖情况。MTT和CCK-8检测原理为活细胞线粒体中的一些脱氢酶能使检测试剂还原为甲瓒，而死细胞无此功能。BrdU和EdU则能都在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的DNA分子，通过基于与荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性。

MTT技术原理

活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。

实验方法

常见问题及注意事项

1、铺板密度不合理，均匀度不一致；

2、实验分组不严谨；

3、实验设置时间点不合理；

4、MTT或CCK8加样时注意事项不明确；

5、血清等影响：高浓度血清或药物颜色会影响试验孔的吸光度值；

6、边缘效应：边缘孔的水分挥发较快，药物易被浓缩。

细胞增殖实验中，确保实验准确性和细胞活性至关重要。样本处理方面，原代细胞取材需严格无菌，尽快放入合适培养基中，避免细胞受损；传代细胞复苏时，要快速解冻，防止冰晶对细胞造成机械损伤，且复苏后及时更换新鲜培养基去除冻存保护剂。

培养过程中，根据细胞特性选择适配的培养基，定期更换以保证营养供应，避免代谢废物积累；控制合适的细胞密度，避免过密导致接触抑制，或过稀影响细胞生长。操作时，严格遵守无菌规范，使用前对耗材、试剂灭菌，防止微生物污染；同时，把握好胰酶消化时间，避免时间过长消化过度或过短细胞难以分离。

此外，冻存细胞时需逐步降温，使用含保护剂的冻存液，以维持细胞在低温下的活性，为后续实验提供良好基础