iTRAQ定量蛋白质组学

iTRAQ定量蛋白质组学

产品介绍：

主要针对翻译产物蛋白质进行高通量测序，可全面快速获得细胞、组织或者完整生物个体的蛋白质组成成分、表达水平与修饰状态等，用于研究蛋白质之间的相互作用与联系，在整体水平上研究蛋白质的组成与调控活动规律。目前已广泛应用于生物学研究、农业、医学等多个领域，主要研究技术有高分辨质谱的标记（SILAC、ITRAQ/TMT）与非标记（label-free）定量定性技术等。

产品优势：

1、高通量，可同时对8/10个样本进行分析，提高了实验通量；

2、分析范围广，可对任何类型的蛋白质进行鉴定；

3、高灵敏度，检测限低，可检测出低丰度蛋白；

4、专业的定制化信息分析服务。

SILAC定量蛋白质组学

产品介绍：

细胞培养氨基酸稳定同位素标记（StableIsotopeLabelingwithAminoacidsinCellculture,SILAC），这种方法首先是由2002年丹麦Mann实验室的Ong等对AACT（氨基酸质量标签）技术作了进一步改进而获得，并首次应用于定量蛋白质组学研究，为全面、系统地定性和定量分析复杂哺乳动物细胞蛋白质组提供了有效的解决方案。

该技术适用于细胞和动物的体内标记，具有系统误差小，定量准确，并且可以进一步寻找具有时效性变化的差异蛋白，更精准地研究刺激的作用机理等技术特点。

产品优势：

1、高通量：可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质；

2、多个样本混合后同时进行分离、酶切和鉴定，后续实验对样品的影响是一致的，减少了实验操作和仪器设备引入的定量误差；

3、体内标记技术，标记不受裂解液成分影响，效果稳定，标记效率高达99%；可以对在DMEM、DMEM-F12、1640三种培养基中培养的多种细胞进行标记；

4、灵敏度高，样本量要求少。

iTRAQ 定量蛋白质组学注意事项

一、样本制备与处理

完整性与纯度：样本采集后需立即低温保存（如 - 80℃），避免反复冻融导致蛋白质降解；组织匀浆或细胞裂解时需使用高效裂解液，确保蛋白质充分释放，同时通过离心或过滤去除核酸、脂类等杂质。

定量准确性：采用 BCA、Bradford 等方法精确测定蛋白浓度，误差需控制在 5% 以内，避免因浓度偏差导致标记效率不均。

二、标记反应控制

标记试剂活化：iTRAQ 试剂需在无水有机溶剂（如乙腈）中充分溶解，避免水分影响标记基团活性；标记前需将蛋白样品用尿素或盐酸胍变性，并通过烷基化封闭巯基，防止二硫键干扰。

反应条件优化：标记温度通常控制在 37℃，时间不少于 2 小时，pH 需维持在 8.0-9.0 以确保氨基与标记试剂充分结合；反应后需通过脱盐柱去除未结合的试剂，避免后续质谱检测干扰。

三、分离与检测环节

色谱 - 质谱参数：液相色谱分离需采用高分辨率 C18 柱（如反相色谱），梯度洗脱时间建议≥90 分钟以保证肽段分离度；质谱检测时需优化喷雾电压、碰撞能量等参数，采用数据依赖采集（DDA）模式提高鉴定深度。

生物重复与质控：至少设置 3 次生物学重复，每批实验需加入混合质控样本（如各样本等比例混合），监测仪器稳定性与实验重复性，避免技术误差影响定量结果。

四、数据分析要点

软件与算法：使用 MaxQuant、Proteome Discoverer 等专业软件进行肽段匹配与定量，注意校正同位素标记效率偏差；通过火山图、热图等可视化手段筛选差异蛋白，结合 GO、KEGG 等数据库进行功能注释，排除假阳性结果。