细胞周期检测

应用简介

细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，执行一定生物学功能（G0期）。由于细胞周期各时相的DNA含量不同，通常正常细胞的G1/ G0期具有二倍体细胞的DNA含量（2N），而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量（4N）,而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。

技术原理

PI可以与DNA结合，其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此，通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期，S期和G2/M期。

实验方法

注意事项

细胞周期检测时，一定不要洗涤。不同于蛋白染料和细胞之间的牢固结合，DNA与染料的结合是一种结合态和游离态之间松散的平衡，不是很牢固，所以洗涤步骤会造成染料丢失，降低核酸的特异性荧光，造成测量值变小。

细胞周期检测需关注样本处理、染色及分析的各个环节，以确保数据准确性。样本制备时，需避免细胞损伤和聚集，消化细胞时胰酶作用时间不宜过长，终止消化后轻柔吹打制成单细胞悬液，防止细胞粘连影响流式细胞仪检测结果；固定环节宜使用预冷 70% 乙醇，缓慢逐滴加入细胞悬液中，4℃固定过夜，避免细胞团块形成。

染色过程中，碘化丙啶（PI）染色需充分避光，且染色时间控制在 30 分钟左右，同时加入 RNase 去除 RNA 干扰，确保 PI 仅与 DNA 结合；若采用 BrdU 标记法，需严格控制 BrdU 加入时间和浓度，避免标记不足或过量。

检测与分析时，流式细胞仪需优化激光功率、电压等参数，设置合适的阈值区分细胞碎片；数据分析软件需精准圈门，防止亚二倍体峰误判为 G1 期；实验应设置空白对照、同型对照及阳性对照，排除背景信号干扰，通过多次生物学重复减少实验误差，保证细胞周期检测结果可靠。