血管生成实验

应用简介

血管生长是肿瘤发生的关键步骤。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2mm，都会有血管生成，这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速，因此，血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用，抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。体外的血管生成实验能很好的模拟肿瘤的血管发生过程，并且适合研究药物对这一过程的影响。

技术原理

应用Matrigel模拟机体环境，上面接种肿瘤细胞，观察血管生成情况。

实验方法

技术总结

1、实验前一天需要将Matrigel置于冰盒，放入冰箱中，同时需要准备一些预冷的枪头用于吸取Matrigel胶；

2、将Matrigel胶加到血管生成载玻片时注意枪头要垂直于内孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流经上孔而留下残留胶；

3、需要按照细胞的生长速度定时采集图像，并且对其成管长度、覆盖面积、成环数和结点进行测量和记录，并且对其进行统计分析；

4、分上下孔的ibidi血管生成载玻片能去除凹液面，使成像效果更好。

5、肿瘤血管生成是一个极其复杂的过程，一般包括包括血管内皮基质降解、内皮细胞移行、内皮细胞增殖、内皮细胞管道化分支形成血管环和形成新的基底膜等步骤。肿瘤血管生成的发生一方面是由于肿瘤细胞释放血管生成因子激活血管内皮细胞，促进内皮细胞的增殖和迁移，另外一方面也是因为内皮细胞旁分泌某些血管生长因子刺激肿瘤细胞的生长。肿瘤细胞和内皮细胞的相互作用自始至

血管生成实验需模拟体内血管新生环境，从材料、操作到检测都需精细把控。基质胶使用时，必须全程冰上操作，避免提前凝固，铺胶厚度要均匀，37℃孵育待其完全凝胶化形成稳定三维结构；若基质胶质量不佳或凝固不充分，会影响内皮细胞的迁移和管腔形成。

细胞接种环节，内皮细胞需处于对数生长期，活力良好，过高或过低的细胞密度都会干扰血管生成，建议每孔接种 5-10×10?个细胞；接种后避免频繁移动培养板，防止破坏细胞排列。培养过程中，使用含血清或血管内皮生长因子（VEGF）的专用培养基维持细胞活性，及时更换培养液防止代谢废物积累。

观察与分析阶段，需在固定时间点（如 6-24 小时）用显微镜拍照记录，保证视野统一；分析时借助 ImageJ 等软件量化管腔长度、节点数等指标，同时设置阳性对照（添加 VEGF）和阴性对照（未处理组），排除背景干扰，多次重复实验确保数据可靠性。