基因提取

应用简介

DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,因此DNA取方面的工作，那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。

在DNA提取过程中应做到：1、根据不同研究需要，保证结构的相应完整性；2、尽量排除其它大分子成分的污染(蛋白质、多糖及RNA等)；3、保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有机溶剂及高浓度的金属离子。下面结合不同的研究对象列出几种相应的DNA提取方法。

技术原理

原核生物的基因是连续不间隔的,直接用限制酶从DNA切取就可得到目的基因，再PCR扩增后就能得到大量目的基因。

真核细胞核基因组DNA编码的基因，以及感染真核细胞的DNA病毒和反转录病毒基因组编码基因，统称真核基因。真核基因调取是指通以动物组织或细胞为模板，提取获得cDNA或gDNA，从中扩增基因或启动子等功能元件。也可将基因片段或者各功能元件片段亚克隆至各载体。

实验方法

1、原核流程

2、真核流程

送样注意事宜

1、DNA样品保存在TEbuffer或超纯水中，并置于1.5mL或2.0mL的灭菌不黏管内，并用封口膜封好。管上用记号笔或标签清晰、准确地标记样品名称。

2、为确保实验的顺利，建议样品备份1~2份，避免部分样品降解导致重新取材、制备或送样，耽误时间。

3、所有样品必须附带一份《样品信息单》，详细填写信息单上所要求的各项样品信息，包括样品编号、样品状态（DNA液体、干粉或组织叶片、血液、肌肉等）、是否可以用完，如果是DNA液体，还需标注浓度、体积、制备时间、电泳图等，随同样品一起寄出，并将电子版发送至销售人员邮箱。

4、尽量使用干冰运输，夏季运输需要适当增加用量；

基因提取需在无污染环境下精细操作，各环节均需严格把控以确保核酸完整性和纯度。样本处理时，新鲜组织需迅速冻存于液氮或 - 80℃，避免反复冻融导致 DNA/RNA 降解；血液样本应及时分离血浆，加入抗凝剂防止核酸酶激活；细菌 / 细胞样本需充分裂解，革兰氏阳性菌需先用溶菌酶处理，动物细胞则用蛋白酶 K 和去污剂破坏细胞膜。

裂解过程中，需严格控制试剂用量和反应温度，RNA 提取需全程佩戴 RNase-free 手套，使用 DEPC 水处理耗材，避免 RNase 污染；DNA 提取时需防止机械剪切力过大（如剧烈涡旋），导致高分子量 DNA 断裂。纯化阶段，酚 - 氯仿抽提需充分离心，吸取上清时避免触及中间蛋白层；乙醇沉淀 DNA/RNA 时，需用预冷试剂并控制温度（-20℃或 - 80℃），提高沉淀效率。

洗涤核酸沉淀时，70% 乙醇需温和操作，避免沉淀丢失；干燥环节不宜过度，以防核酸变性。提取后需立即检测浓度和纯度（紫外分光光度法或 Qubit），电泳验证完整性，短期保存于 4℃，长期需分装冻存于 - 20℃或 - 80℃，避免反复冻融。实验需设置空白对照，排除试剂污染干扰。